植物油中黄曲霉毒素B1含量的免疫亲和柱法

准确称取植物油试样5.0 g试样（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入20 mL乙腈-水（84+16）溶液，涡旋混合1 min，超声提取20 min，在5000 r/min离心10 min，提取上清液4 mL于另一个离心管中，加入21 mL水，混匀待净化。

(1)上样：将12 mL注射器连接于免疫亲和柱上端，取待净化液样品液以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。

(2)淋洗和洗脱：用20 mL水淋洗柱子，分两次淋洗，弃掉流出的液体；抽干小柱；加入2×1 mL甲醇缓慢洗脱亲和柱，流速约为2-3滴/秒；50 ℃下氮吹至近干，待衍生。

(1)加入100 uL三氟yi酸，200 uL正己烷于待衍生样品中，于40 ℃水浴避光衍生15 min。

(2)重新溶解：50 ℃下氮吹至近干，加入1mL乙腈-水（15+85）溶液溶解，0.22 um滤膜过滤，供HPLC分析。

设备：Waters Alliance 2695

色谱柱：InerSustain^®-C18 (4.6 mmX250 mm, 5 μm)

检测器：Waters 2475荧光检测器

检测波长：激发波长：365 nm 发射波长：435 nm

流动相：A：乙腈   B：水

洗脱方式：梯度洗脱

表1 流动相梯度洗脱程序

流速：1 mL/min

进样体积：10 uL